生物系の研究者の方に質問なのですが、

(ウェットで専門的な質問で申し訳ない)
GFP抗体で良いものは無いでしょうか?

Clonetech社のEGFPベクターを使っており、
Clonetech社のGFP抗体でウェスタンブロットしているのですが、
293T細胞などをウェスタンブロットすると、
無処理の細胞でさえ意味の分からんバンドがたくさん出てきて困ってます。

目的のGFP融合タンパク質は非常に発現が悪いタンパク質なので、
非特異的なバンドの少ない(特に30-60kDa付近)GFP抗体を御存知でしたら御教授下さい。
マウスでもラビットでも構わないし、
常識の範囲内なら、金に糸目もつけません。

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回答(1件)

id:Alnasl No.1

Alnasl回答回数9ベストアンサー獲得回数02005/06/14 23:19:37

ポイント40pt

http://probes.invitrogen.com/

Invitrogen - Molecular Probes - Home

URLはMolecular Probesです。直接的な答えではないのでポイントはいただかなくてもよいです。

ClonetechのEGFP vectorを使ったことがあります。発現しにくいタンパクでしたが、しかしClonetech社の抗体でクリアなシングルバンドが得られました。293系細胞でした。

文章からはどのような検討をされたのかはわかりませんが、別会社製を試す前に、別ロットを出すよう頼んでみてもだめでしょうか?抗体はロットが変わると反応がガラリとよくなることがあります。あるいは2次抗体がべたべた反応することもあるので、こちらを変える、抗体濃度を変える、など。

蛍光顕微鏡で明らかに発現の有無が見える、などの明らかなデータが示せるなら、それをもとにClontech社に問い合わせてみるのも良いかもしれません。

参考になるとよいのですが。成功を祈ります。

id:match7

れれれ?

クリアなバンドが得られましたか……

発現はきちんとしてるはずです。

二次抗体は別の抗体でも大して問題出てないので、

やっぱり一次抗体に原因があると思っているんですが。

それってどのくらいの大きさのタンパクでした?

僕が293Tでやると、50kDa付近に変なバンドが出てしまい、それがちょうど目的物とかぶるのです。

もう使い終わりそうだから、もう一回注文してみて考えようかな?

=========================================

原因が分かりました。

うちの研究室にあったのは、

GFP monoclonal antibody

ってやつで、こいつはWB向きじゃないんですね。

ってか、こんなクソ抗体売らないでくれー。

2005/06/15 20:33:53

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